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亚细胞分级分离

亚细胞分离是研究特定的细胞内结构、细胞器、蛋白或评估这些大分子结构之间联系性的一个重要步骤。亚细胞分级分离利用亚细胞结构的其中一个或多个属性,如浮力密度、表面电荷密度、尺寸和形状等,主要根据其在4℃下高粘度的介质中的差速离心而进行分离。用于差速离心的介质主要有蔗糖、甘露醇,甘油,Ficoll 400(蔗糖的多聚物),Percoll(胶体二氧化硅)和碘克沙醇(OptiPrep)。蔗糖被广泛使用是因为它价格低廉。但这些介质都有各自的优点和局限性, Harford和Bonifacino 在 2011年的文章中对此有详细讨论。本文将主要阐述这些方法,但偏重于那些容易为大多数实验室所操作,而且耗时少的方法,因为快速分离至关重要。凝胶过滤、亲和层析、电泳或选择性密度迁移干扰等方法也可使用。现有操作规程的条件改变是取决于所分离的细胞器、组织或细胞类型和所使用的设备。强烈建议阅读所引用的参考文献中每个操作规程的全部细节。最后,需要通过特定标记物的检测来确定整个分离过程中所搜集的各组分的的纯度和产率。


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